北京艾德莱生物有着植物RNA提取,北京植物RNA提取的研究院,例如棉花RNA提取、苹果RNA提取等。
一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案:很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分,造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长,太繁琐,手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。
下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因:市面上最常见的RNA提取试剂盒无非是两种:第一种:TRIzol改良类方法(包括溶液型的和离心柱型的)、第二种:直接裂解过柱子的方法(离心柱)
第一种试剂盒失败的原因1:RNA市面上面最流行的方法就是TRIzol,或者TRIzol改良,或者TRIzol加离心柱一类的改良方法。TRIzol也就是异硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最适合的对象是动物源性的组织细胞,针对普通多糖多酚低的植物性的材料,TRIzol类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下,TRIzol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰,要么残留大量DNA,要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物,氧化破坏RNA,或者残留这些多糖多酚,色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制,市面上绝大多数的国产厂家是使用TRIzol的方法进行改良,无论是不是加了离心柱。但是实践证明,改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单:是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿,如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二种试剂盒失败的原因:直接裂解过柱子的方法是目前最先进的方法,但是也是技术含量最高的方法。这个方法采用裂解液(不含苯酚,氯仿)直接裂解,RNA/DNA同时过柱子,然后在柱子上面直接分离RNA/DNA,所以,这种方法的优点第一在于,避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离RNA/DNA的弊端、第二在于,不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因为其技术先进,所以难度很高,国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。第一,裂解液的成分必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚,代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和TRIzol原理不同,直接过柱法DNA/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一个难点。否则会残留大量DNA。
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